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          RIPA裂解液(強)100ml 現貨

          RIPA裂解液(強)100ml 現貨

          型    號:
          所屬分類:分離試劑類
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          RIPA裂解液(強)100ml 現貨
          強中弱三種,價格都一樣,220元/瓶,有現貨!

          RIPA裂解液(強)100ml 現貨產品概述:

          RIPA裂解液(強)

          我們生產的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等。

              RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種,根據其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。關于不同的RIPA裂解液以及我們生產的其它裂解液的主要特點和差異,以及如何選擇裂解液可參考附錄。

              RIPA裂解液(強)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及2mM sodium pyrophosphate,25mM β-glycerophosphate,1mM EDTA,1mM Na3VO4,0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑??梢杂行б种频鞍捉到?。

              用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用我們生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

          包裝清單:

          產品編號

          產品名稱

          包裝

          P1002

          RIPA裂解液(強)

          100ml

           

          PMSF(100mM)

          1.5ml

          保存條件: -20℃保存,一年有效。

          注意事項:為取得*的使用效果,盡量避免過多的反復凍融??梢赃m當分裝后使用。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。關于裂解液的選擇,一方面可以參考我們生產的各種裂解液主要特點、差異,選擇合適的裂解液;另一方面也需要通過一些預實驗來摸索*的適合您實驗條件的裂解液。

          使用說明:
          對于培養細胞樣品:
          1. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
          2. 對于貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。
             對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。
          3. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
             裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。
          對于組織樣品:
          1. 把組織剪切成細小的碎片。
          2. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
          3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。)
          4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
          5. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
          6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
          注:RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正?,F象。該透明膠狀物為含有基因組
          DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如NFκB、p53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子。

           

          附:我們生產的各種裂解液主要特點、差異和選擇
          首先請參考下表,了解各種裂解液的主要特點和差異。

          產品編號

          P1001

          P1002

          P1004

          P1006

          P1010

          P1012

          產品名稱

          Western及IP細胞裂解液

          RIPA裂解液()

          RIPA裂解液()

          RIPA裂解液(弱)

          NP-40裂解液

          SDS裂解液

          有效裂解成分

          1% Triton X-100

          1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS

          1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS

          1% NP-40,0.25% deoxycholate

          1% NP-40

          1% SDS

          裂解強度

          溫和

          溫和

          溫和

          對膜蛋白的提取

          一般

          很好

          較好

          一般

          一般

          很好

          對胞漿蛋白的提取

          很好

          很好

          很好

          很好

          很好

          很好

          對核蛋白的提取

          較好

          很好

          較好

          較好

          較好

          很好

          胞漿磷酸化蛋白提取

          很好

          很好

          很好

          很好

          很好

          很好

          細胞核轉錄因子提取

          很好

          很好

          很好

          很好

          很好

          很好

          含蛋白酶抑制劑

          含磷酸酯酶抑制劑

          主要用途

          WB, IP,co-IP

          WB, IP

          WB, IP

          WB, IP, co-IP

          WB, IP,co-IP

          WB, ChIP

              用于普通的Western、IP或co-IP,我們推薦使用Western及IP細胞裂解液(P0013),該裂解液已被國內各大研究機構廣泛使用,用戶普遍反映很好。裂解細胞或組織后,沒有非常粘滯的透明狀DNA團塊形成,不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續操作。 另外該裂解液裂解的產物也適合用于磷酸化蛋白的Western檢測。 
              對于某些特殊蛋白的IP,如果發現Western及IP細胞裂解液(P0013)效果不是非常理想,可以嘗試用RIPA裂解液(強、中或弱)或NP-40裂解液。如果發現IP的時候背景很高,即非特異的蛋白也被IP下來,則需要選用裂解強度較高的裂解液,例如RIPA裂解液(強或中)。如果發現目的蛋白無法被IP下來,則說明裂解液的強度過強,可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
              對于某些難溶解蛋白的Western,如果發現Western及IP細胞裂解液(P0013)效果不是非常理想,可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液(強、中)或SDS裂解液。

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